病毒 DNA 复制机器由解旋酶—引物酶（helicase-primase）和 DNA 聚合酶组成，必须在复制叉上协同工作。冷冻电镜能得到单个单位蛋白的高分辨率构象，但它的结果是静态的；生化实验（凝胶、放射性标记）能检测蛋白活性，却是数以亿计分子活动的平均化结果。

中间的空白是：单个复制机器在真实 DNA 上究竟如何运动？药物结合后它是彻底罢工，还是仍在挣扎？ 这正是单分子实验的独特视角。

HSV-1 的解旋酶—引物酶复合物（H/P）由UL5（解旋酶）、UL52（引物酶）和 UL8 组成。Pritelivir、amenamevir 这类解旋酶—引物酶抑制剂（HPI）是治疗耐药疱疹感染的重要候选药物，但它们如何抑制活性一直缺乏单分子层面的证据。

研究团队用 C-Trap 动态单分子荧光光镊系统搭建了解旋实验：将 17.7kb 的 dsDNA/ssDNA 杂合底物通过生物素—链霉亲和素连接在两个聚苯乙烯小球之间，在恒定张力下监测珠间距变化——解旋酶每把一段 dsDNA 拆成 ssDNA，DNA 就会伸长，珠间距随之增大。

结果非常清晰：

• 只有野生型 H/P 复合物时，DNA 被持续解旋，无可见暂停，平均速率 33nt/s（n = 41）；

• 加入 pritelivir 后，速率剂量依赖地下降：100 nM 降至 25nt/s（暂停比例 17.9%）、200 nM 降至 17nt/s（25.6%）、500      nM 仅剩 9.5nt/s（暂停比例飙升至 51.5%）；

• 而携带耐药突变的 UL5K356N 或UL52F360R 复合物，在 500nM 药物下仍保持 22–23 nt/s 的解旋速率，暂停比例仅约 4%。

这说明 HPI 并非让解旋酶完全停转，而是把它“锁”在失活的开放构象中，使其在 DNA 上反复卡顿。 这与冷冻电镜观察到的构象完全吻合。两套数据互为印证，构成了完整证据链。

猴痘病毒 E5 蛋白是六聚体解旋酶—引物酶，单独存在时处于自抑制状态，解旋活性极弱；只有与聚合酶全酶（F8/A22/E4）组装后才会被激活。激活机制此前不明。

C-Trap 实验给出了关键判据：在 52pN 张力下，E5 单独时几乎无持续性解旋（n = 19），聚合酶单独时亦无活性（n = 12）；两者按 1:2 混合后则出现持续解旋，1:10 比例同样成立。这说明聚合酶的直接结合是解旋活性开启的必要条件。

C-Trap 在此处的作用不仅是“确认活性”，更是把“结合—构象变化—活性激活”三者定量关联起来，为冷冻电镜揭示的 E5 大幅构象重排提供了功能学证据。

从群体平均到单分子、从静态构象到实时动态，上述两项顶刊研究共同表明：冷冻电镜与动态单分子技术的联合应用，正逐步成为病毒复制机制研究的标准范式。

这一转变的方法学意义在于：传统生化测定所反映的，是数以亿计分子在时间与群体上双重平均后的结果，复制机器的异步行为、暂态停滞与个体差异均被平均化而不可见；C-Trap  则将测量对象还原为单个分子，使同一台机器在真实 DNA 底物上的连续运动轨迹成为可直接观测的量。

换言之，C-Trap 的价值并不限于光镊本身，而在于将光镊、多通道微流控与单分子共聚焦显微成像技术整合于同一平台，从而把“分子机器如何工作”这一原本只能由群体平均数据间接推断的命题，还原为单分子层面的实时动态过程。